Biologie Moléculaire

Biologie Moléculaire

Biologie Moléculaire

Responsable: Pierre de Coppet

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Contact : pierre.decoppet@inrae.fr

Extraction purification et dosage des acides nucléiques ADN, ARN 

  • Extraction à partir de tissus de prélèvements biologiques ou de cellules en cultures
  • Purification par extraction de phase ou colonne d’affinité
  • Dosage par absorbance UV ou molécules fluorescences (intercalants), sur micro-volumes 

Analyses des acides nucléiques ADN et ARN

  • Migration sur gel d’électrophorèse d’agarose
  • Rétro-transcription des ARN 
  • Analyse des microARNs (miRNA) impliqués dans la régulation de nombreuses fonctions biologiques et comme biomarqueurs de certaines pathologies.
  • Design d’amorces
  • Amplification par PCR Classique ou quantitative en temps réels (Sybrgreen ou Taqman) 

Etude de l’expression transcriptionnelle

- Reverse transcription, PCRq

- Utilisation de gènes reporter (luminescence ou fluorescence), de vecteurs d’expression génique (surexpression), de SiRNA, (sous expression)

- Construction de vecteur, clonage de produits de PCR

Etudes des modifications épigénétiques

- Immuno-précipitation de la chromatine ChIP

- IP des facteurs de transcription

- Etude de l’acétylation des histones

- Méthylation de l’ADN approche globale ou ciblée (design des amorces, conversion de l’ADN au bisulfite, PCR, réaction de pyroséquençage)

Biochimie des protéines

- Extraction de protéines à partir d’organes ou cellules

- Dosages métaboliques : absorption et oxydation glucose et butyrate (radioactivité 14C)

- Chromatographies (échangeuses d’ions, phase inverse, affinité, gel filtration)

- Electrophorèses (agarose et polyacrylamide), bidimensionnelle

- Western-Blot, dot-blot, in-cell western

- Immuno-précipitation de protéines (IP)

- Immuno-marquage

- Dosages multiplex (Luminex) d’hormones, cytokines

- Dosage des métabolites sanguins, dosage colorimétriques et ELISA

Date de modification : 21 novembre 2023 | Date de création : 02 février 2021 | Rédaction : UMR PhAN 1280